此基因與細(xì)菌的質(zhì)粒相結(jié)合要依靠（）酶和（）酶，其作用部位是磷酸二酯鍵，然后將目的基因移植到酵母菌體內(nèi)，酵母菌在基因工程中叫（）。

在獲得目的基因的過(guò)程中，PCR技術(shù)相當(dāng)重要。PCR擴(kuò)增反應(yīng)需要在一定的緩沖溶液中加入DNA模板、分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種（）、四種脫氧核苷酸和（）的DNA聚合酶。

圖中①一般經(jīng)（）處理可以得到③，從③到④的過(guò)程中涉及到的生物技術(shù)有（）和（）。

④階段是否可使用不添加植物激素的培養(yǎng)基？理由是什么？

在形成圖中③的過(guò)程中，獲?、诘耐緩街饕袕幕蛭膸?kù)中獲取、（）、人工合成。

圖中科學(xué)家在進(jìn)行①操作時(shí)，要用同一種（）分別切割目的基因和運(yùn)載體，運(yùn)載體的黏性末端與目的基因DNA片段的黏性末端就可通過(guò)（）（鍵名）而結(jié)合，遵循（）原則。

科學(xué)家最初在做抗蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，雖然用一定的方法已檢測(cè)出棉花的植株中含有抗蟲(chóng)基因，但讓棉鈴蟲(chóng)食用棉的葉片時(shí)，棉鈴蟲(chóng)并沒(méi)有被殺死，這說(shuō)明（）?？茖W(xué)家在研究的基礎(chǔ)上又一次對(duì)棉花植株中的抗性基因進(jìn)行了修飾，然后在讓棉鈴蟲(chóng)食用棉的葉片，結(jié)果食用的第二天棉鈴蟲(chóng)就死亡了。

操作步驟：從人的（）獲取目的基因；目的基因與（）結(jié)合構(gòu)建基因表達(dá)載體；在基因表達(dá)載體中還應(yīng)插入（）和終止子。然后把基因表達(dá)載體導(dǎo)入牛的（），通過(guò)發(fā)育形成的牛體細(xì)胞含人的（），成熟的牛產(chǎn)的的奶中含有（），證明基因操作成功。

圖中的III是導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)、篩選最終獲得一株有抗蟲(chóng)特性的轉(zhuǎn)基因植株。經(jīng)分析，該植株含有一個(gè)攜帶目的基因的DNA片段，因此可以把它看作是雜合子。理論上，在該轉(zhuǎn)基因植株自交產(chǎn)生的F1中，仍具有抗蟲(chóng)特性的植株占總數(shù)的（），原因是（）。

基因工程操作的基本步驟是：①（）；②（）；③（）；④（）。