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問答題用于克隆的 DNA在質(zhì)量上有什么要求？

1.問答題假定你從黏質(zhì)沙雷氏菌中克隆了一個基因，并推測可能是依賴于鋅的金屬蛋白酶，因為它含有兩個組氨酸和一個谷氨酸與鋅形成鋅指結(jié)構(gòu)。請你設(shè)計一個方案，改變其中一個組氨酸看看是否改變蛋白酶的活性？

2.問答題溶菌酶是破碎細菌細胞的有效方法。但有些細菌的孢子對溶菌酶不敏感，應(yīng)該如何處理？

3.問答題分離pBR322 DNA可考慮用氯霉素擴增，分離 pUCl8質(zhì)粒 DNA則不必用氯霉素擴增，為什么？

4.問答題從細菌中分離總 DNA，應(yīng)采取哪些措施獲得高分子量的 DNA？

5.問答題說明合成接頭在基因工程中的主要作用。

6.問答題PCR 的基本原理是什么？用 PCR擴增某一基因，必須預(yù)先得到什么樣的信息？

7.問答題何為柯斯質(zhì)粒載體，其結(jié)構(gòu)、特點是什么？

8.問答題分離 DNA時，為什么要在緩沖液中加入一定濃度的 EDTA和蔗糖？

9.問答題Sanger的雙脫氧法測序的原理。

10.問答題PCR反應(yīng)包括引物與 DNA模板鏈間的解鏈與復(fù)性。討論循環(huán)溫度范圍對引物-DNA雙螺旋穩(wěn)定性的影響及對 PCR產(chǎn)率的影響。