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問答題用一限制性內(nèi)切核酸酶切割 Lac⁺Tet^r的質(zhì)粒載體，已知該酶識別的是4個堿基序列，并產(chǎn)生有兩個堿基突出的單鏈末端，該酶在 lac 基因內(nèi)有切割位點(diǎn)，并在第二個氨基酸密碼子內(nèi)，該位點(diǎn)可以被任何氨基酸所取代而不影響酶活性。用該酶切割后，用 DNA聚合酶將單鏈末端補(bǔ)齊為雙鏈的平末端，然后重新連接成環(huán)，轉(zhuǎn)化 Lac-Tet^s受體菌，篩選 Tet 轉(zhuǎn)化子，問：Lac^r的基因型是什么？并說明原因。

參考答案： 基因型是lac- 原因是在該密碼子中插入了兩個堿基，造成了移碼突變，所以Lac的基因是缺陷的。

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1.問答題什么是Western 印跡？它與 Southern 印跡有什么不同？

參考答案：Western印跡是將蛋白質(zhì)經(jīng)電泳分離后從凝膠中轉(zhuǎn)移到固相支持物上,然后用特異性的抗體進(jìn)行檢測。它與Southern的不...

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2.問答題用 EcoRI和 HindⅢ分別切割同一來源的染色體 DNA，并進(jìn)行克隆，在前者的克隆中篩選到 A基因，但在后者的克隆中未篩選到 A基因，請說明原因。

參考答案：原因是：HindⅢ的切點(diǎn)在 A基因內(nèi)。

3.問答題一個攜帶有氨芐和卡那霉素抗性基因的質(zhì)粒被僅在卡那霉素基因中有識別位點(diǎn)的EcoRI消化。消化物與酵母 DNA 連接后轉(zhuǎn)化對兩種抗生素都敏感的 E.coli 菌株。（1）利用哪一種抗生素抗性選擇接受了質(zhì)粒的細(xì)胞？（2）怎樣區(qū)分接受了插入酵母 DNA的質(zhì)粒的克??？

參考答案：

（1）選擇Amp^r的轉(zhuǎn)化子；
（2）所需的克隆是Amp^r和Kan^r。任何能夠抗這兩種藥物的克隆都是自連的非重組質(zhì)粒。

4.問答題插入失活和插入表達(dá)法篩選重組體的主要差別是什么？

參考答案：主要差別是：插入失活法是直接根據(jù)失活基因的表型變化來篩選重組體；插入表達(dá)是根據(jù)一個基因的失活引起另一個基因的表達(dá)表型來選...

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5.問答題切口移位（nick translation）標(biāo)記探針的主要步驟有哪些？

參考答案：（1）DNaseI造成切口；
（2）DNA聚合酶Ⅲ的 5’3’外切核酸酶進(jìn)行切割；

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