打算將一個 cDNA 克隆到一個表達載體，以便在 E．coli 中大量制備相應的蛋白質。這個cDNA 的兩側具有 BamHI的位點，因此計劃將它從 BamHI的位點插入載體中。實驗嚴格地按照克隆手冊中的方法進行：載體用 BamHI切割以后，立即用堿性磷酸酶處理除去 5’磷酸；接著將處理過的載體同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA連接酶后進行溫育，連接之后，將 DNA 同已處理過的可以接受 DNA的細菌感受態(tài)細胞混合。最后，將混合物涂布在加有抗生素固體培養(yǎng)基的平板上。由于載體上帶有抗生素的抗性基因，所以，轉化的細菌能夠存活。實驗中同時設置了 4 個對照： 
對照1：   將未同任何載體接觸過的細菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上；       
對照2：   將未切割載體轉化過的細菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上；  
對照3：   將經切割（但未用堿性磷酸酶處理）并用連接酶連接（但沒有cDNA片段）的載體轉化過的細菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上；  
對照4：   將經切割（并用堿性磷酸酶處理過）并用 DNA連接酶連接（但沒有cDNA片段）的載體轉化過的細
菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上。  
     在進行第一次實驗時，感受態(tài)細胞不是自己制備的，結果，在所有的平板上都長出了多到無法計數(shù)的菌落（表 2）。在第二次實驗中，自己制備感受態(tài)細胞，但這一次，所有的平板上都沒有菌落生長（表 2）。接著又進行了第三次實驗，這次得到了轉化子（表 2）。從實驗平板上挑出 12 個菌落，分離了質粒 DNA，并用 BamHI進行切割，其中 9個克隆產生大小同載體一樣的單一的一條帶，另三個克隆中切出一個cDNA 片段，實驗終于獲得成功。

打算將一個 cDNA 克隆到一個表達載體，以便在 E．coli 中大量制備相應的蛋白質。這個cDNA 的兩側具有 BamHI的位點，因此計劃將它從 BamHI的位點插入載體中。實驗嚴格地按照克隆手冊中的方法進行：載體用 BamHI切割以后，立即用堿性磷酸酶處理除去 5’磷酸；接著將處理過的載體同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA連接酶后進行溫育，連接之后，將 DNA 同已處理過的可以接受 DNA的細菌感受態(tài)細胞混合。最后，將混合物涂布在加有抗生素固體培養(yǎng)基的平板上。由于載體上帶有抗生素的抗性基因，所以，轉化的細菌能夠存活。實驗中同時設置了 4 個對照： 
對照1：   將未同任何載體接觸過的細菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上；       
對照2：   將未切割載體轉化過的細菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上；  
對照3：   將經切割（但未用堿性磷酸酶處理）并用連接酶連接（但沒有cDNA片段）的載體轉化過的細菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上；  
對照4：   將經切割（并用堿性磷酸酶處理過）并用 DNA連接酶連接（但沒有cDNA片段）的載體轉化過的細
菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上。  
     在進行第一次實驗時，感受態(tài)細胞不是自己制備的，結果，在所有的平板上都長出了多到無法計數(shù)的菌落（表 2）。在第二次實驗中，自己制備感受態(tài)細胞，但這一次，所有的平板上都沒有菌落生長（表 2）。接著又進行了第三次實驗，這次得到了轉化子（表 2）。從實驗平板上挑出 12 個菌落，分離了質粒 DNA，并用 BamHI進行切割，其中 9個克隆產生大小同載體一樣的單一的一條帶，另三個克隆中切出一個cDNA 片段，實驗終于獲得成功。

打算將一個 cDNA 克隆到一個表達載體，以便在 E．coli 中大量制備相應的蛋白質。這個cDNA 的兩側具有 BamHI的位點，因此計劃將它從 BamHI的位點插入載體中。實驗嚴格地按照克隆手冊中的方法進行：載體用 BamHI切割以后，立即用堿性磷酸酶處理除去 5’磷酸；接著將處理過的載體同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA連接酶后進行溫育，連接之后，將 DNA 同已處理過的可以接受 DNA的細菌感受態(tài)細胞混合。最后，將混合物涂布在加有抗生素固體培養(yǎng)基的平板上。由于載體上帶有抗生素的抗性基因，所以，轉化的細菌能夠存活。實驗中同時設置了 4 個對照： 
對照1：   將未同任何載體接觸過的細菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上；       
對照2：   將未切割載體轉化過的細菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上；  
對照3：   將經切割（但未用堿性磷酸酶處理）并用連接酶連接（但沒有cDNA片段）的載體轉化過的細菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上；  
對照4：   將經切割（并用堿性磷酸酶處理過）并用 DNA連接酶連接（但沒有cDNA片段）的載體轉化過的細
菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上。  
     在進行第一次實驗時，感受態(tài)細胞不是自己制備的，結果，在所有的平板上都長出了多到無法計數(shù)的菌落（表 2）。在第二次實驗中，自己制備感受態(tài)細胞，但這一次，所有的平板上都沒有菌落生長（表 2）。接著又進行了第三次實驗，這次得到了轉化子（表 2）。從實驗平板上挑出 12 個菌落，分離了質粒 DNA，并用 BamHI進行切割，其中 9個克隆產生大小同載體一樣的單一的一條帶，另三個克隆中切出一個cDNA 片段，實驗終于獲得成功。

打算將一個 cDNA 克隆到一個表達載體，以便在 E．coli 中大量制備相應的蛋白質。這個cDNA 的兩側具有 BamHI的位點，因此計劃將它從 BamHI的位點插入載體中。實驗嚴格地按照克隆手冊中的方法進行：載體用 BamHI切割以后，立即用堿性磷酸酶處理除去 5’磷酸；接著將處理過的載體同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA連接酶后進行溫育，連接之后，將 DNA 同已處理過的可以接受 DNA的細菌感受態(tài)細胞混合。最后，將混合物涂布在加有抗生素固體培養(yǎng)基的平板上。由于載體上帶有抗生素的抗性基因，所以，轉化的細菌能夠存活。實驗中同時設置了 4 個對照： 
對照1：   將未同任何載體接觸過的細菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上；       
對照2：   將未切割載體轉化過的細菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上；  
對照3：   將經切割（但未用堿性磷酸酶處理）并用連接酶連接（但沒有cDNA片段）的載體轉化過的細菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上；  
對照4：   將經切割（并用堿性磷酸酶處理過）并用 DNA連接酶連接（但沒有cDNA片段）的載體轉化過的細
菌細胞涂布在培養(yǎng)平板上。  
     在進行第一次實驗時，感受態(tài)細胞不是自己制備的，結果，在所有的平板上都長出了多到無法計數(shù)的菌落（表 2）。在第二次實驗中，自己制備感受態(tài)細胞，但這一次，所有的平板上都沒有菌落生長（表 2）。接著又進行了第三次實驗，這次得到了轉化子（表 2）。從實驗平板上挑出 12 個菌落，分離了質粒 DNA，并用 BamHI進行切割，其中 9個克隆產生大小同載體一樣的單一的一條帶，另三個克隆中切出一個cDNA 片段，實驗終于獲得成功。

λYES（酵母—大腸桿菌穿梭載體）是構建 cDNA 文庫的高效載體，這種載體是λ噬菌體基因組與一個在大腸桿菌和酵母中都能復制的質粒巧妙結合而成，它兼有病毒和質粒載體的優(yōu)點。cDNA 被插入載體的質粒部分，然后它能在體外被包裝入病毒顆粒中，包裝起來的載體感染大腸桿菌的效率比質粒本身要高得多。一旦進入了大腸桿菌，λYES中的質粒序列能夠被誘導重組出λ基因組，并進行獨立復制，這就可以從質粒中分離出來，以便進行進一步的遺傳操作。       為了最大限度地提高克隆效率，載體用只有一個切點的限制性內切核酸酶 XhoI（5’-C十 TCGAG）進行切割，然后在 dTTP 存在的情況下，同 DNA 聚合酶一起進行溫育。將一種具有平末端的雙鏈 cDNA 同一段含由兩段寡聚核苷酸組成的雙鏈寡聚核苷酸接頭連接起來，這兩段寡聚核苷酸的序列是：5’—CGAGATTTACC 和5’—GGTAAATC，它們的 5’端都是磷酸。然后將載體和 cDNA混合并連接在一起。采用這種方法用 2μg的7載體和 0.1μg 的 cDNA，構建了一個有 4×10 個克隆的 cDNA 文庫。