問答題分別敘述原核基因組和真核基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。

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7.問答題

打算將一個(gè) cDNA 克隆到一個(gè)表達(dá)載體,以便在 E.coli 中大量制備相應(yīng)的蛋白質(zhì)。這個(gè)cDNA 的兩側(cè)具有 BamHI的位點(diǎn),因此計(jì)劃將它從 BamHI的位點(diǎn)插入載體中。實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格地按照克隆手冊(cè)中的方法進(jìn)行:載體用 BamHI切割以后,立即用堿性磷酸酶處理除去 5’磷酸;接著將處理過的載體同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合,加入 DNA連接酶后進(jìn)行溫育,連接之后,將 DNA 同已處理過的可以接受 DNA的細(xì)菌感受態(tài)細(xì)胞混合。最后,將混合物涂布在加有抗生素固體培養(yǎng)基的平板上。由于載體上帶有抗生素的抗性基因,所以,轉(zhuǎn)化的細(xì)菌能夠存活。實(shí)驗(yàn)中同時(shí)設(shè)置了 4 個(gè)對(duì)照: 
對(duì)照1:   將未同任何載體接觸過的細(xì)菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上;       
對(duì)照2:   將未切割載體轉(zhuǎn)化過的細(xì)菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上;  
對(duì)照3:   將經(jīng)切割(但未用堿性磷酸酶處理)并用連接酶連接(但沒有cDNA片段)的載體轉(zhuǎn)化過的細(xì)菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上;  
對(duì)照4:   將經(jīng)切割(并用堿性磷酸酶處理過)并用 DNA連接酶連接(但沒有cDNA片段)的載體轉(zhuǎn)化過的細(xì)
菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上。  
     在進(jìn)行第一次實(shí)驗(yàn)時(shí),感受態(tài)細(xì)胞不是自己制備的,結(jié)果,在所有的平板上都長出了多到無法計(jì)數(shù)的菌落(表 2)。在第二次實(shí)驗(yàn)中,自己制備感受態(tài)細(xì)胞,但這一次,所有的平板上都沒有菌落生長(表 2)。接著又進(jìn)行了第三次實(shí)驗(yàn),這次得到了轉(zhuǎn)化子(表 2)。從實(shí)驗(yàn)平板上挑出 12 個(gè)菌落,分離了質(zhì)粒 DNA,并用 BamHI進(jìn)行切割,其中 9個(gè)克隆產(chǎn)生大小同載體一樣的單一的一條帶,另三個(gè)克隆中切出一個(gè)cDNA 片段,實(shí)驗(yàn)終于獲得成功。

為什么要用堿性磷酸酶處理載體?
8.問答題

打算將一個(gè) cDNA 克隆到一個(gè)表達(dá)載體,以便在 E.coli 中大量制備相應(yīng)的蛋白質(zhì)。這個(gè)cDNA 的兩側(cè)具有 BamHI的位點(diǎn),因此計(jì)劃將它從 BamHI的位點(diǎn)插入載體中。實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格地按照克隆手冊(cè)中的方法進(jìn)行:載體用 BamHI切割以后,立即用堿性磷酸酶處理除去 5’磷酸;接著將處理過的載體同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合,加入 DNA連接酶后進(jìn)行溫育,連接之后,將 DNA 同已處理過的可以接受 DNA的細(xì)菌感受態(tài)細(xì)胞混合。最后,將混合物涂布在加有抗生素固體培養(yǎng)基的平板上。由于載體上帶有抗生素的抗性基因,所以,轉(zhuǎn)化的細(xì)菌能夠存活。實(shí)驗(yàn)中同時(shí)設(shè)置了 4 個(gè)對(duì)照: 
對(duì)照1:   將未同任何載體接觸過的細(xì)菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上;       
對(duì)照2:   將未切割載體轉(zhuǎn)化過的細(xì)菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上;  
對(duì)照3:   將經(jīng)切割(但未用堿性磷酸酶處理)并用連接酶連接(但沒有cDNA片段)的載體轉(zhuǎn)化過的細(xì)菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上;  
對(duì)照4:   將經(jīng)切割(并用堿性磷酸酶處理過)并用 DNA連接酶連接(但沒有cDNA片段)的載體轉(zhuǎn)化過的細(xì)
菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上。  
     在進(jìn)行第一次實(shí)驗(yàn)時(shí),感受態(tài)細(xì)胞不是自己制備的,結(jié)果,在所有的平板上都長出了多到無法計(jì)數(shù)的菌落(表 2)。在第二次實(shí)驗(yàn)中,自己制備感受態(tài)細(xì)胞,但這一次,所有的平板上都沒有菌落生長(表 2)。接著又進(jìn)行了第三次實(shí)驗(yàn),這次得到了轉(zhuǎn)化子(表 2)。從實(shí)驗(yàn)平板上挑出 12 個(gè)菌落,分離了質(zhì)粒 DNA,并用 BamHI進(jìn)行切割,其中 9個(gè)克隆產(chǎn)生大小同載體一樣的單一的一條帶,另三個(gè)克隆中切出一個(gè)cDNA 片段,實(shí)驗(yàn)終于獲得成功。

對(duì)照3 和4 各有什么作用?
9.問答題

打算將一個(gè) cDNA 克隆到一個(gè)表達(dá)載體,以便在 E.coli 中大量制備相應(yīng)的蛋白質(zhì)。這個(gè)cDNA 的兩側(cè)具有 BamHI的位點(diǎn),因此計(jì)劃將它從 BamHI的位點(diǎn)插入載體中。實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格地按照克隆手冊(cè)中的方法進(jìn)行:載體用 BamHI切割以后,立即用堿性磷酸酶處理除去 5’磷酸;接著將處理過的載體同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合,加入 DNA連接酶后進(jìn)行溫育,連接之后,將 DNA 同已處理過的可以接受 DNA的細(xì)菌感受態(tài)細(xì)胞混合。最后,將混合物涂布在加有抗生素固體培養(yǎng)基的平板上。由于載體上帶有抗生素的抗性基因,所以,轉(zhuǎn)化的細(xì)菌能夠存活。實(shí)驗(yàn)中同時(shí)設(shè)置了 4 個(gè)對(duì)照: 
對(duì)照1:   將未同任何載體接觸過的細(xì)菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上;       
對(duì)照2:   將未切割載體轉(zhuǎn)化過的細(xì)菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上;  
對(duì)照3:   將經(jīng)切割(但未用堿性磷酸酶處理)并用連接酶連接(但沒有cDNA片段)的載體轉(zhuǎn)化過的細(xì)菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上;  
對(duì)照4:   將經(jīng)切割(并用堿性磷酸酶處理過)并用 DNA連接酶連接(但沒有cDNA片段)的載體轉(zhuǎn)化過的細(xì)
菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上。  
     在進(jìn)行第一次實(shí)驗(yàn)時(shí),感受態(tài)細(xì)胞不是自己制備的,結(jié)果,在所有的平板上都長出了多到無法計(jì)數(shù)的菌落(表 2)。在第二次實(shí)驗(yàn)中,自己制備感受態(tài)細(xì)胞,但這一次,所有的平板上都沒有菌落生長(表 2)。接著又進(jìn)行了第三次實(shí)驗(yàn),這次得到了轉(zhuǎn)化子(表 2)。從實(shí)驗(yàn)平板上挑出 12 個(gè)菌落,分離了質(zhì)粒 DNA,并用 BamHI進(jìn)行切割,其中 9個(gè)克隆產(chǎn)生大小同載體一樣的單一的一條帶,另三個(gè)克隆中切出一個(gè)cDNA 片段,實(shí)驗(yàn)終于獲得成功。

影響第二次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的原因是什么?對(duì)照2 的作用何在?
10.問答題

打算將一個(gè) cDNA 克隆到一個(gè)表達(dá)載體,以便在 E.coli 中大量制備相應(yīng)的蛋白質(zhì)。這個(gè)cDNA 的兩側(cè)具有 BamHI的位點(diǎn),因此計(jì)劃將它從 BamHI的位點(diǎn)插入載體中。實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格地按照克隆手冊(cè)中的方法進(jìn)行:載體用 BamHI切割以后,立即用堿性磷酸酶處理除去 5’磷酸;接著將處理過的載體同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合,加入 DNA連接酶后進(jìn)行溫育,連接之后,將 DNA 同已處理過的可以接受 DNA的細(xì)菌感受態(tài)細(xì)胞混合。最后,將混合物涂布在加有抗生素固體培養(yǎng)基的平板上。由于載體上帶有抗生素的抗性基因,所以,轉(zhuǎn)化的細(xì)菌能夠存活。實(shí)驗(yàn)中同時(shí)設(shè)置了 4 個(gè)對(duì)照: 
對(duì)照1:   將未同任何載體接觸過的細(xì)菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上;       
對(duì)照2:   將未切割載體轉(zhuǎn)化過的細(xì)菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上;  
對(duì)照3:   將經(jīng)切割(但未用堿性磷酸酶處理)并用連接酶連接(但沒有cDNA片段)的載體轉(zhuǎn)化過的細(xì)菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上;  
對(duì)照4:   將經(jīng)切割(并用堿性磷酸酶處理過)并用 DNA連接酶連接(但沒有cDNA片段)的載體轉(zhuǎn)化過的細(xì)
菌細(xì)胞涂布在培養(yǎng)平板上。  
     在進(jìn)行第一次實(shí)驗(yàn)時(shí),感受態(tài)細(xì)胞不是自己制備的,結(jié)果,在所有的平板上都長出了多到無法計(jì)數(shù)的菌落(表 2)。在第二次實(shí)驗(yàn)中,自己制備感受態(tài)細(xì)胞,但這一次,所有的平板上都沒有菌落生長(表 2)。接著又進(jìn)行了第三次實(shí)驗(yàn),這次得到了轉(zhuǎn)化子(表 2)。從實(shí)驗(yàn)平板上挑出 12 個(gè)菌落,分離了質(zhì)粒 DNA,并用 BamHI進(jìn)行切割,其中 9個(gè)克隆產(chǎn)生大小同載體一樣的單一的一條帶,另三個(gè)克隆中切出一個(gè)cDNA 片段,實(shí)驗(yàn)終于獲得成功。

你如何看待第一次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果?對(duì)照 1 的目的是什么?