基因工程操作的基本步驟是：①（）；②（）；③（）；④（）。

被①處理后的分散細胞進行培養(yǎng)，通常要在培養(yǎng)液中添加一定量的（），此外應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，以便保證被培養(yǎng)的細胞處于無菌無毒的環(huán)境中進行培養(yǎng)。

卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長。欲利用含卡那霉素的培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入抗病基因的香蕉細胞，重組質(zhì)粒中應(yīng)同時含有（）基因，作為標記基因。

操作步驟：從人的（）獲取目的基因；目的基因與（）結(jié)合構(gòu)建基因表達載體；在基因表達載體中還應(yīng)插入（）和終止子。然后把基因表達載體導(dǎo)入牛的（），通過發(fā)育形成的牛體細胞含人的（），成熟的牛產(chǎn)的的奶中含有（），證明基因操作成功。

科學(xué)家最初在做抗蟲實驗時，雖然用一定的方法已檢測出棉花的植株中含有抗蟲基因，但讓棉鈴蟲食用棉的葉片時，棉鈴蟲并沒有被殺死，這說明（）。科學(xué)家在研究的基礎(chǔ)上又一次對棉花植株中的抗性基因進行了修飾，然后在讓棉鈴蟲食用棉的葉片，結(jié)果食用的第二天棉鈴蟲就死亡了。

此基因與細菌的質(zhì)粒相結(jié)合要依靠（）酶和（）酶，其作用部位是磷酸二酯鍵，然后將目的基因移植到酵母菌體內(nèi)，酵母菌在基因工程中叫（）。

獲取目的基因途徑有（）、（）。

“分子運輸車”是（）。

②、③階段是否可使用同種培養(yǎng)基？理由是什么？

在獲得目的基因的過程中，PCR技術(shù)相當重要。PCR擴增反應(yīng)需要在一定的緩沖溶液中加入DNA模板、分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種（）、四種脫氧核苷酸和（）的DNA聚合酶。